O Que Causa O Erro De Página SDS Western Blot E Como Corrigi-lo

Se você tiver a página de solução de problemas de Western Blot SD correta em seu computador, este guia talvez possa ajudar.

Você pode consertar seu laptop ou desktop em apenas alguns minutos, sem a necessidade de habilidades. Clique aqui para ver como.

Possíveis causas de Western Blotting e recomendações para ausência de bandas Verifique se após a transferência bem sucedida das proteínas separadas particulares para a membrana, a coloração Ponceau insignificante é observada. Reduza a maior parte do fator de diluição de um para um ou anticorpo secundário; Complete os anticorpos mais usados ​​e tente atualizar.

Links relacionados

Ocidentais se jogam como guia

Guia de solução de problemas

Controles de download recomendados

Preparação da amostra

solução de problemas do blog sds do western blot

Congelar página SDS

Transferência de proteínas originalmente do gel para a membrana

Immunoblot e detecção

Limpeza e reprovação da membrana

O que causa bandas fracas em SDS-PAGE?

Bandas onduladas, fracas ou normalmente difusas podem aparecer quando os suplementos protéicos são deficientes, as proteínas de ligação positiva à membrana são de baixo custo, sempre houve mudança de pressão entre o nosso próprio gel e esta membrana em particular durante a transferência ou transferência, a proteína exata a certo peso molecular seria definitivamente otimizado.

Transferir armazenamento

Mostrar quase quase registros

SOLUÇÃO DE PROBLEMAS

O guia de solução de problemas abaixo destina-se amplamente a explicar as causas juntamente com possíveis soluções para problemas comuns através dos quais ocorrem ao traduzir para o ocidente.

Atualizado

Você está cansado de ver seu computador lento? Irritado com mensagens de erro frustrantes? Reimage é a solução para você! Nossa ferramenta recomendada diagnosticará e reparará rapidamente os problemas do Windows, aumentando drasticamente o desempenho do sistema. Então não espere mais, baixe o Reimage hoje mesmo!

  • 1. Baixar Reimage
  • 2. Execute o programa
  • 3. Clique em "Verificar agora" para encontrar e remover qualquer vírus do seu computador

  • Sem sinal ou sinal fraco

    Centralização de anticorpos primários muito baixa

  • Aumente a concentração real de anticorpos primários (a titulação deve ajudar). O Kit de Anticorpos de Concentração Novus pode acabar sendo usado para aumentar a concentração entre os anticorpos primários.
  • Eleve a amostra incubada até 4°C durante a noite.
  • Se o anticorpo pai for definitivamente reutilizado muitas vezes, qualquer concentração de anticorpo ultra poderosa pode ser adequadamente baixa; use anticorpo fresco para amplificar o sinal específico
  • A concentração de proteína alvo é sempre baixa

  • Carregar mais proteína no belo (a titulação provavelmente pode ajudar)
  • Use um lisado de movimento positivo que expresse os suplementos de proteína alvo, um lisado de superexpressão ou uma proteína recombinante fabulosa.
  • Certifique-se de que o tampão de lise foi um dos tampões ideais para a proteína alvo; O escudo de lise difere dependendo do centro, incluindo a localização da proteína.
  • Se necessário, use imunoprecipitação também conhecida como fracionamento (como fracionamento atômico) para aumentar a concentração de uma proteína essencial que não é abundante.
  • Incluir inibidores de protease presentes no tampão de lise
  • Certifique-se de que uma amostra particular fabulosa não seja estragada.
  • A transferência de proteínas devido ao gel para a membrana falhou posteriormente

  • Se necessário, confirme se os aminoácidos foram transferidos com sucesso para a própria membrana, manchando a membrana, bem como as manchas de Ponceau ou Coomassie, apontando o gel.
  • Confirme a mesma transferência apenas lendo a impressão do controle de download.
  • Os anticorpos primários e legítimos são incompatíveis

  • Certifique-se de que a ideia de que o anticorpo antiespécie adicional foi construído ao mesmo tempo que um anticorpo primário específico.
  • (por exemplo, se o anticorpo predominante foi obtido de camundongos, neste caso, use um anticorpo extra anti-camundongo)
  • A escolha da membrana foi realmente ideal

  • Verifique a hidrofobicidade/hidrofilicidade de sua sequência antigênica. As membranas de PVDF podem funcionar melhor com antígenos hidrofílicos/polares/carregados, embora a nitrocelulose provavelmente funcione melhor com antígenos hidrofóbicos/não polares
  • Normalmente, há problemas de bloqueio

  • O bloqueio por muito tempo pode mascarar muitos epítopos e inibir a ligação de anticorpos; Reduza a incubação de bloqueio ou o foco em relação ao bloqueio de tempo resolvido.
  • Vá para uma solução proibitiva exclusiva
  • Lavagem excessiva da membrana

  • Os reagentes de detecção podem ficar inativos com o tempo. Certifique-se de que os reagentes são frescos. Um anticorpo alternativo pode ser testado apenas aplicando-o à membrana, além de incubar o blot com o reagente do sensor.
  • Use reagentes muito mais sensíveis ao trabalhar com proteínas em pequenas quantidades (a titulação pode ajudar; use oceano ultrapuro para diluir).
  • Você pode sobrecarregar o Western blot?

    A grande maioria do anticorpo IP pode capturar não especificamente o anticorpo elogio. IP com o pote mínimo normalmente associado a anticorpos para manter a sobrecarga de gel e simplesmente use uma determinada incubação, se recomendado. Recomendamos não usar mais de 10-20 µg de anticorpos IP em aproximadamente uma via/poço individual para evitar sobrecarga.

    A imagem de introdução era muito curta

  • Aumente o número de dias em relação à exposição (teste várias vezes para calcular o tempo de exposição ideal).
  • O anticorpo só percebe proteínas nativas

  • Realmente use proteínas reconstituídas e desnaturadas se você ganhar dinheiro com anticorpos que detectam apenas proteínas naturais.
  • Os alvos têm um peso molecular extra menor do que os alvos padrão

  • Reduza o tempo de transferência para evitar transferências excessivas. A mancha úmida pode ser recomendada para proteínas secundárias, bem como para membranas com poros de pele menores (0,2 μm vs. 0,45 μm)
  • Azida de sódio causa bactérias

  • Azida de sódio (muitas vezes acostumada a armazenar anticorpos genéricos) inibe a atividade do HRP. Certifique-se de que a roupa pode ser lavada o suficiente para remover a azida do sal marinho ou use almofadas oceânicas sem azida.
  • UMA

    Fundo uniforme alto

    Bloqueio insuficiente

  • Aumente ligeiramente o tempo e/ou a temperatura de redução.
  • Aumente o reagente simultaneamente (tente aumentar a concentração do reagente para 10%).
  • Considere um agente bloqueador de manutenção (leite em vez de BSA)
  • Inclua bloqueadores opcionais contidos em tampões de anticorpos (também podem ser aumentados a cada porcentagem).
  • Bloqueio incompatível

  • Não recomendado para detecção de todas as proteínas fosforiladas (o leite e a caseína são ricos em fosfoproteínas)
  • Ligação não específica que garantirá alta concentração de anticorpos

  • Reduza a concentração exata com a titulação da solução principal ou do ensino médio (pode ajudar)
  • Contém um agente bloqueador da barreira de anticorpos.
  • Confirme a indicação desses anticorpos secundários manipulando o anticorpo suplementar: omita o anticorpo primário e também incubar o blot apenas com o anticorpo em questão.
  • Lavagem insuficiente de anticorpos não ligados

  • Aumente você vê, o número e/ou a duração das lavagens.
  • Membrana seca

  • Certifique-se de que a membrana nunca desidrate durante o protocolo Western Blot.
  • Por que, na verdade, meus western blots não estão necessariamente funcionando?

    Você pode ter usado completamente uma configuração diferente de Limpar filtro para detecção. Certifique-se de que sua família configurou esses dispositivos para medir os comprimentos de onda de cura. Na verdade, o tempo de exposição talvez não seja suficiente ao fotografar o local específico do item. Tente renderizar o local com um tempo de exposição maior.

    Filme vínculo muito longo

  • Diminua o período de exposição (pode ser necessário testar uma faixa geral de tempos de exposição).
  • Os reagentes de detecção são inquestionavelmente muito sensíveis

  • Dilua o reagente do detector em água limpa ou use o reagente de detecção menos sensível perfeito.
  • UMA

    Listras ausentes/massa errada ou possivelmente várias listras

    Proteína alvo abaixo do limite de ligação não específico

  • Carregar mais e novas proteínas na SDS-PAGE do gel de tijolos e argamassa
  • Enriquecer proteínas imunossupressoras de baixo conteúdoPrecipitação com fracionamento
  • Degradação da amostra

  • Use lisados ​​frescos
  • Mantenha a amostra nas geleiras antes do ativador do tampão de amostra, além de ferver.
  • Sempre inclua inibidores de protease em uma mistura com inibidores de fosfatase quando um alvo fosforilado principal for detectado.
  • Outras isoformas de peptídeos de saúde podem estar presentes

  • Splicing alternativo, também conhecido como formação de multímeros, pode ser significativo para você. Isso pode exigir algum tipo de anticorpo específico de isoforma.
  • Às vezes, modificações pós-traducionais podem estar muito presentes

  • O peso molecular previsto muitas vezes pode ser melhorado por muitos fatores, como o uso de glicosilação, fosforilação, bem como o processamento de proteínas (assumindo clivagem de do para forma). Para confirmar a especificidade, lidere controles positivos, como lisado recombinante ou, às vezes, lisado de superexpressão de proteínas, lisado de expressão negativa de knockdown/knockout, além de controles negativos.
  • UMA

    Fundo manchado ou rodopiante

    Manuseio incorreto da membrana

  • Minimize falar com em combinação com a membrana. Use ferramentas limpas para fazer algo oferecendo a membrana.
  • Poluição tampão

  • Criar novos selos
  • Bolhas de ar

  • Vire completamente os géis de pele e a camada de membrana entre as ampolas antes de começar a transferir.
  • Agregação de HRP

  • Filtre esses anticorpos secundários com um fabuloso filtro 0,2 para remover agregados.
  • western absorve a solução de problemas da página sds

    Se você está procurando uma maneira de consertar seu PC, não procure mais. Reimage é uma solução completa que pode ajudá-lo a se livrar de vírus e malware, aumentar o desempenho do sistema, reparar erros do Registro do Windows e muito mais.

    Western Blot Sds Page Troubleshooting
    Dépannage De La Page Western Blot Sds
    Western Blot Sds-sida Felsökning
    Rozwiązywanie Problemów Ze Stroną Western Blot SD
    Western Blot Sds 페이지 문제 해결
    Устранение неполадок со страницей Western Blot Sds
    Fehlerbehebung Auf Der Western Blot Sds-Seite
    Solución De Problemas De La Página Western Blot Sds
    Risoluzione Dei Problemi Della Pagina Sds Western Blot