Что вы видите, ошибка страницы вестерн-блоттинга SDS, а также как ее исправить

Если на вашем компьютере есть страница устранения неполадок Western Blot SD, вам может помочь это руководство по стратегии.

Вы можете починить свой ноутбук или настольный компьютер за считанные минуты, не требуя специальных навыков. Нажмите здесь, чтобы узнать, как это сделать.

Возможные причины вестерн-блоттинга и рекомендации при отсутствии полос Убедитесь, что после успешного распространения разделенных белков на эту мембрану определяется легкое окрашивание Понсо. Уменьшите коэффициент разбавления на единицу, при которой будет одно или вторичное антитело; Заполните много многоразовых антител и попробуйте обновить.

<массив><тело>

<дт>

Ссылки по теме

Руководство по западному дайвингу

Руководство по устранению неполадок

Рекомендуемые элементы управления извлечением

Подготовка проб

Устранение неполадок страницы SDS Western Soak

Заморозить страницу SDS

Перенос белков с геля на мембрану

Иммуноблот и дополнительно обнаружение

Очистка и повторное зондирование мембраны

Что дает слабые полосы в SDS-PAGE?

Волнистые, не слишком сильные или иногда диффузные полосы могут звучать при дефиците белка, обнадеживающее связывание белков с тканевым слоем низкое, в настоящее время всегда есть колебания давления между нашим собственным наполнителем и мембраной во время переноса, переноса, белка определенного молекулярная масса определенно оптимизирована.

Перенос хранилища

Показать большую часть всех журналов

<дт>

УСТРАНЕНИЕ НЕИСПРАВНОСТЕЙ

Следующее руководство по устранению неполадок, как правило, предназначено для объяснения любых причин и возможных решений широко распространенных проблем, возникающих при переводе в помощь Западу.

Обновлено

Вы устали от того, что ваш компьютер работает медленно? Раздражают разочаровывающие сообщения об ошибках? Reimage - это решение для вас! Рекомендуемый нами инструмент быстро диагностирует и устраняет проблемы с Windows, значительно повышая производительность системы. Так что не ждите больше, скачайте Reimage сегодня!

  • 1. Скачать Reimage
  • 2. Запустите программу
  • 3. Нажмите "Сканировать сейчас", чтобы найти и удалить все вирусы на вашем компьютере.

  • Нет сигнала или плохой сигнал

    Слишком низкая концентрация первичных антител

    <ул>

  • Увеличьте точную концентрацию первичных антител (может помочь повторное титрование). Набор Novus Concentration Antibody Kit можно использовать для увеличения точной концентрации первичных антител.
  • Поднять большую часть инкубируемого образца до 4 °C на ночь.
  • Если родительское или охранное антитело используется повторно слишком много дней или недель, любая эффективная концентрация антител всегда может быть слишком низкой; используйте свежие антитела, когда вам нужно усилить сигнал
  • Концентрация целевого белка определенно низкая

    <ул>

  • Добавление белка в эту лунку (вероятно, может помочь титрование)
  • Используйте новый лизат с положительной активностью, который экспрессирует целевой белок, лизат со сверхэкспрессией или рекомбинантный белок.
  • Убедитесь, что ваш буфер для лизиса является одним из хороших буферов для целевого белка; Буфер для лизиса различается в зависимости от основного центра локализации белка.
  • При необходимости проводит иммунопреципитацию или фракционирование (например, фракционирование по Фишеру) для увеличения концентрации, относящейся к белку, который скорее является избыточным.
  • Включить ингибиторы протеазы в буфер для лизиса
  • Сделайте так, чтобы конкретный образец не испортился.
  • Перенести белки из геля на какую-либо мембрану в итоге не удалось

    <ул>

  • При необходимости подтвердите, что белки были успешно заменены на мембрану, окрасив эту мембрану разливами Понсо или Кумасси, указывая на гель.
  • Подтвердите общий перенос, прочитав распечатку мастер загрузки.
  • Первичные и законные антитела оказываются несовместимыми

    <ул>

  • Убедитесь, что дополнительное антивидовое антитело создается при тех же усилиях, что и основное.
  • (например, если вы обнаружите, что первичное антитело было получено не от мышей, в этом случае используйте новое отличное вторичное антитело против мыши)
  • Выбор мембранного слоя не был идеальным

    <ул>

  • Проверьте гидрофобность/гидрофильность антигенной последовательности. Мембраны PVDF, возможно, будут лучше работать с гидрофильными/полярными/заряженными антигенами, фактически нитроцеллюлоза может лучше работать с гидрофобными/неполярными антигенами
  • Есть проблемы с блокировкой

    <ул>

  • Слишком затянутая блокировка может маскировать многие эпитопы и нарушать связывание антител; Уменьшите инкубацию блокировки, также известную как сосредоточение внимания на разрешении блокировки по времени.
  • Используйте отличное уникальное решение для блокировки.
  • Чрезмерное промывание конкретной мембраны

    <ул>

  • Реагенты для обнаружения могут стать неактивными по крайней мере на некоторое время. Убедитесь, что реагенты являются типичными свежими. Альтернативное антитело можно тестировать автоматически, нанося его на точную мембрану и инкубируя блот благодаря реагенту для обнаружения.
  • Используйте гораздо более сложные реагенты при работе с белками, посещая низкие концентрации (может помочь титрование; для разбавления используйте сверхчистую воду).
  • Можете ли вы действительно перегрузить Вестерн-блоттинг?

    Подавляющее большинство, включая IP-антитело, могут неспецифически собирать распознающее антитело. IP с фактическим минимальным количеством, обычно связанным с антителами, чтобы избежать перегрузки геля, и просто используйте расширенную инкубацию, если это рекомендовано. Мы рекомендуем использовать не более 10-20 мкг IP-антител на предмет каждой дорожки/лунки, чтобы избежать перегрузки.

    Вступление было слишком коротким

    <ул>

  • Увеличьте количество дней воздействия (протестируйте несколько случаев, чтобы определить оптимальное время воздействия).
  • Антитело, вероятно, распознает нативные белки

    <ул>

  • Используйте восстановленные и денатурированные белки, если вы зарабатываете на жизнь антителами, которые в основном обнаруживают только нативные белки.
  • Мишени имеют меньшую молекулярную массу, чем стандартные мишени

    <ул>

  • Сократите время переназначения, чтобы избежать чрезмерных переносов. Влажный блоттинг рекомендуется для вторичного необходимого белка, а также для мембран и пор меньшего размера (0,2 мкм, т.к. 0,45 мкм)
  • Азид натрия вызывает бактерии

    <ул>

  • Азид натрия (часто используемый для хранения легких антител) ингибирует активность HRP. Убедитесь, что это белье достаточно выстирано, чтобы отфильтровать азид натрия, или используйте не содержащие азиды прокладки из морской соли.
  • А

    Высокий однородный фон

    Недостаточная блокировка

    <ул>

  • Немного умножьте время блокировки и/или температуру.
  • Увеличьте концентрацию реагента (попробуйте увеличить концентрацию реагента до 10%).
  • Рассмотрите возможность замены блокирующего агента (молоко вместо BSA)
  • Включить необязательные блокаторы, содержащиеся в буферах антител (также можно увеличить в процентах).
  • Заблокировать несовместимое

    <ул>

  • Не рекомендуется для обнаружения фосфорилированных белков (молоко, следовательно, казеин богат фосфопротеинами)
  • Неспецифическое связывание для обеспечения высокой концентрации, указывающей на антитела

    <ул>

  • Уменьшите концентрацию с помощью основного или вторичного раствора (может помочь) титрованием)
  • Содержит хороший агент, блокирующий буфер антител.
  • Подтвердите индикатор вторичного антитела, влияя на вторичное антитело: опустите антитело один к одному и инкубируйте блот, а также только законное антитело.
  • Недостаточная промывка из-за несвязавшихся антител

    <ул>

  • Увеличьте количество и/или продолжительность промывок.
  • Сухая мембрана

    <ул>

  • Убедитесь, что мембранный слой никогда не обезвоживается во время протокола вестерн-блоттинга.
  • Почему мои кляксы западного мира не работают?

    Возможно, вы использовали совершенно другие настройки фильтра Clear для прогноза. Убедитесь, что ваша семья упаковала устройство для измерения всех правильных длин волн. На самом деле времени раскрытия может не хватить при съемке именно этой локации. Попробуйте оставить место с более длительным временем загара.

    Слишком долгая адгезия пленки

    <ул>

  • Сократите время публичности (может потребоваться, чтобы опробовать широкий диапазон разоблачений).
  • Реагенты для обнаружения на самом деле слишком чувствительны

    <ул>

  • Разбавьте каждый из наших реагентов для обнаружения в чистой воде, кроме того, используйте менее чувствительные реагенты для сенсоров.
  • А

    Отсутствуют полосы/неправильный размер или возможно множество полос

    Целевой белок ниже порога неспецифического связывания

    <ул>

  • Загрузка большего количества белков в SDS-PAGE с помощью настоящего геля
  • Обогащение иммуносупрессивными белками с низким содержанием. Осаждение при фракционировании.
  • Ухудшение качества образца

    <ул>

  • Используйте свежие лизаты
  • Оставьте пробу на льду непосредственно перед активатором потока проб и кипячением.
  • Всегда включайте ингибиторы протеазы в комбинацию с ингибиторами фосфатазы до обнаружения фосфорилированной мишени.
  • Могут присутствовать другие изоформы медицинского белка

    <ул>

  • Альтернативный сплайсинг, известный как формирование мультимеров, может быть вам полезен. Для этого может потребоваться антитело, специфичное к изоформе.
  • Иногда могут присутствовать посттрансляционные изменения

    <ул>

  • Предсказанный молекулярный прирост может быть улучшен многими вопросами, такими как использование, связанное с гликозилированием, фосфорилированием и процессингом белка (предполагая, что грудь из преформы в форму). Чтобы указать специфичность, запускайте положительные контроли, такие как рекомбинантный лизат или иногда лизат со сверхэкспрессией оздоровительных белков, лизат, экспрессирующий нокдаун/нокаут даунэкспрессии, здесь в дополнение к отрицательным контролям.
  • А

    Крапчатый или, возможно, закрученный фон

    Неправильное обращение с этой мембраной

    <ул>

  • Сведите к минимуму контакт в сочетании с обязательной мембраной. Используйте чистые инструменты, чтобы провести что-нибудь с мембраной.
  • Загрязнение буфера

    <ул>

  • Создавайте интересные штампы
  • Пузырьки воздуха

    <ул>

  • Переверните гели для кожи и, кроме того, мембрану между ампулами на 100 % перед переносом.
  • Агрегация HRP

    <ул>

  • Отфильтруйте эти другие антитела с помощью фильтра 0,2, чтобы удалить агрегаты.
  • устранение неполадок в истории western blot sds

    Если вы ищете способ починить свой компьютер, не ищите дальше. Reimage — это универсальное решение, которое может помочь вам избавиться от вирусов и вредоносных программ, повысить производительность вашей системы, исправить ошибки реестра Windows и многое другое.

    Western Blot Sds Page Troubleshooting
    Dépannage De La Page Western Blot Sds
    Western Blot Sds-sida Felsökning
    Solução De Problemas De Página De Western Blot Sds
    Rozwiązywanie Problemów Ze Stroną Western Blot SD
    Western Blot Sds 페이지 문제 해결
    Fehlerbehebung Auf Der Western Blot Sds-Seite
    Solución De Problemas De La Página Western Blot Sds
    Risoluzione Dei Problemi Della Pagina Sds Western Blot
    г.